38加納 純子27Junko KANOH朝光かおり28Kaori ASAMITSUセントロメアおよびサブテロメアと相互作用するSgo2蛋白質による染色体機能ネットワークの解明(2014年採択)Chromosomal network via Sgo2 associating with centromeres and subtelomeres(Project 2014)分子動力学計算を用いたHIV転写活性化因子Tatと転写伸長因子P-TEFbの相互作用の解析(2014年採択)Analysis of interaction mechanism between HIV-encoded transactivating protein (Tat) and the positive transcription elongation factor b (P-TEFb) by molecular dynamics simulation(Project 2014)ing the active enzyme genes. The DNA immobilized on the collected microbeads can be amplified by PCR and used for the next round of selection, or finally for cloning and sequencing.遺伝情報を担うDNAとタンパク質などからなる染色体は，構造的，機能的に様々なドメインから構成される．しかし，テロメアに隣接するサブテロメアのクロマチン構造や機能についてはまだ不明な点が多い．我々は，真核生物で広く保存されているセントロメアタンパク質Sgo2が細胞周期の間期にサブテロメアに局在し，knobと呼ばれる高度に凝縮したクロマチン構造の形成に必須であることを明らかにした．さらに，Sgo2が欠失すると，サブテロメア遺伝子群の転写抑制がなくなり，サブテロメアのlate originからの時期尚早な複製が見られた．以上のことから，Sgo2によって形成されるサブテロメアの特殊なクロマチンドメインは，適切な遺伝子発現と複製タイミングを保障していると考えられる．A chromosome is composed of structually and functionally distinct domains. However, the molecular mecha-nisms undelying the formation of chromatin structure and the function of subtelomeres, the telomere-adjacent regions, remain obscure. Here we report the roles of the conserved centromeric protein Sgo2 in defining chro-matin structure and functions of the subtelomeres in fission yeast. We show that Sgo2 localizes at the subtel-omeres during interphase and is essential for the formation of a highly condensed subtelomeric chromatin body 'knob'. Furthermore, the absence of Sgo2 leads to the depression of the subtelomeric genes and prema-ture DNA replication at the subtelomeric late origins. Thus, the subtelomeric specialized chromatin domain organized by Sgo2 ensures proper gene expression and replication timing.HIV由来の転写活性化因子Tatは，HIV転写活性化に必須の分子である．Tatは転写伸長因子P-TEFb（Cyclin T1とCDK9からなる)と複合体（HIV転写活性化複合体）を形成し，転写を活性化させる．本研究では，HIV転写活性化複合体の立体構造を基に分子動力学（MD）シミュレーションを行い，Tat制御に重要なP-TEFbの局所構造を決定した．また，Fluoppi (Fluorescent-based technology detecting pro-tein-protein interactions)システムを用いて，HIV転写活性複合体のタンパク間相互作用が細胞内で測定できるシステムを開発した．最後に，新規抗Tat化合物を見つけるために，in silicoスクリーニングを施行した．これらの結果は，効果的な抗HIV化合物の開発に重要な情報となる．The virus-encoded Tat protein is essential for HIV transcription in infected cells. The interaction of Tat with the cellular transcription elongation factor P-TEFb (positive transcriptional elongation factor b) containing Cyclin T1 (CycT1) and Cyclin-dependent kinase 9 (CDK9) is critical for its activity. In this study, we per-formed molecular dynamics (MD) simulation using the 3D data for HIV transcriptional activator complex (Tat/P-TEFb complex) to further analyze the dynamic characteristics of proteins. Moreover, we utilize the Fluoppi (Fluorescent-based technology detecting protein-protein interactions) system, which enables the quantification of interactions between biomolecules, such as proteins, in live cells. Finally, we performed in
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