旭硝子財団助成研究成果報告2019
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obtained in the microfluidic device might be weak compared with the protein crystal obtained by the conventional crystallization method. in this study, we developed the methodology of protein crystal structure analysis using the microarray device.近年,様々な細胞機能の制御における機能分子のナノスケールの空間配置の重要性を示唆する報告が相次いでいる.超解像顕微鏡技術は,従来の光学顕微鏡の空間解像度(200 nm)を超えるスペックを有している.中でも1分子蛍光局在法を計測原理とするSTORM法は解析対象分子に対する抗体に標識した蛍光色素を確率的かつまばらに明滅させて蛍光輝点の中心位置をマッピングする作業を数万枚の画像に対して繰り返し行うことで,超解像顕微鏡法の中では群を抜いた高い空間分解能(10 nm程度)でのイメージングを可能にしている.空間解像度では比類ないSTORM法ではあるが,蛍光色素の確率的明滅のために細胞毒性の高い還元剤を添加する必要があるため,現状では生細胞には適用できない.本研究では有機化学と抗体化学を融合することで還元剤を用いない新しい原理による高速の蛍光明滅法の開発に取り組み,生細胞で高い時空間解像度を有する超解像イメージングを可能にした.Recently there have been successive reports suggesting the importance of nanoscale spatial arrangement of functional molecules in the control of various cellular functions. Super-resolution microscopy technology has specifications that exceed the diffraction limit of conventional optical microscopes (200 nm). Among them, the STORM method, which based on the single-molecule fluorescence localization microscopy, to map the center position of the stochastically appeared bright spot within thousands of images, which enables the reconstruction of the super-resolution image with a high spatial resolution (10 ~20 nm). Although the spatial resolution is an unrivaled STORM method, it is not applicable to living cells at present because the addition of a highly cytotoxic reducing agent for stochastic blinking of fluorescent dyes. In this study, we developed a high-speed fluorescence blinking method based on a new principle that does not use a reducing agent by combining organic chemistry and antibody chemistry and enabled super-resolution imaging with high spatiotemporal resolution in living cells.  ■■■■■  Shigeyuki NAMIKI■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■Development of novel superresolution microscopy technique based on antibody chemistry and organic chemistry(Project 2017)旭硝子財団 助成研究成果報告(2019)

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